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Techniques de type ELISA

Les protéines sont des molécules constituées d’acides aminés. Elles peuvent être des composants structurels de la cellule ou exercer les fonctions de la cellule, comme les enzymes ou les protéines de stockage. Les protéines sont codées par les gènes, et peuvent donc être spécifiques d’une espèce. Elles restent toutefois sensibles à la chaleur et sont détruites par les températures excessives.

Avantages des protéines

  • Les protéines sont proches des fonctions de la cellule, et donc directement en rapport avec une propriété recherchée.
  • Les protéines sont reconnues par le système immunitaire et de ce fait, sont détectables par les anticorps qui apportent une haute spécificité

 

Les techniques immunologiques de détection des protéines

La technique ELISA sandwich :
 La technique ELISA sandwich, pour Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay, utilise un premier anticorps spécifique de la protéine recherchée qui est immobilisé sur un support plastique et qui va capter la protéine recherchée.
Dans un deuxième temps, un deuxième anticorps spécifique, couplé à une enzyme (un conjugué), est fixé sur la protéine d’intérêt. Le système est ensuite révélé par l’addition d’un substrat qui se colore.
 Ce type de test a l’avantage d’être rapide et facile à pratiquer dans un laboratoire spécialisé. Il a par contre l’inconvénient, dans un produit alimentaire complexe, de manquer de spécificité vis à vis des protéines et de manquer de sensibilité car l’on ne peut pas prendre de risque quant au seuil de positivité du test qui s’exprime relativement à un témoin souvent difficile à produire.
 En effet les matrices agroalimentaires complexes ont des effets de déplacement des anticorps immobilisés sur le plastique qui génèrent des faux positifs si l’on n’y prend garde, ce qui n’est pas la garantie d’une bonne spécificité au niveau de l’espèce dans notre cas.
 La limite de détection est de l’ordre du ppm d’extrait brut de l’espèce recherchée.

La technique ELISA compétition :
 La technique ELISA compétition utilise une protéine à rechercher immobilisée sur un support plastique et un anticorps spécifique conjugué à une enzyme qui est révélé par l’addition d’un substrat qui se colore.
Ce système de révélation est mis en compétition par une mise en présence préalable d’un échantillon à doser avec l’anticorps conjugué. L’anticorps conjugué est alors bloqué par la protéine recherchée et n’est donc pas révélé sur le support plastique.
Ce système fonctionne à l’envers dans le sens où plus il y a de protéine présente moins il y a de coloration.